引物长度:引物设计中，一对引物的长度可以是不一样的长的吗

目录1.引物设计中，一对引物的长度可以是不一样的长的吗2.引物的设计原则3.PCR扩增的正反向引物的长度必须一致吗？4.引物长度越长,到底是特异性增加还是减少呢?5.已知引物序列，如何通过primer5.0找到目的基因的长度6.pcr引物产物长度控制在多长合适7.引物设计原则1.引物设计中，一对引物的长度可以是不一样的长的吗当然可以，Tm值相近，没有错配，二聚体及发卡结构就可以。不过两条引物之间的长度不要相差太大。我试过16/28，PCR没有问题2.引物的设计原则引物设计原则1、长度：其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度)，PCR扩增中的复性温度一般是较低Tm值引物的Tm值减去5—10度。引物长度小于20时，3、碱基分布的随机性：应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3’端出现超过3个的连续G或C，否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。不能含有自身互补序列，5、引物之间：两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，一个引物的3‘末端序列不允许结合到另一个引物的任何位点上。每个引物的3‘末端碱基应为G或C。8、引物应当超出限制性内切酶识别位点至少3个核苷酸。扩展资料引物合成1、是将预先连接在固相载体上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应，脱去其5′-羟基的保护基团DMT，2、合成DNA的原料，亚磷酰胺保护核苷酸单体。3.PCR扩增的正反向引物的长度必须一致吗？如果你用过一些引物设计的软件，软件设计出来的引物长度有可能不同（当然，这有可能是考虑的引物Tm，引物二聚体，引物非特异性结合等问题。4.引物长度越长,到底是特异性增加还是减少呢?Tm值相近，没有错配，二聚体及发卡结构就可以。5.已知引物序列，如何通过primer5.0找到目的基因的长度两种方法：打开Primer 5 FILE New 然后粘入基因序列 再点Primer就可以看到S A 点S 再点Edit Primers 然后把你的上游引物序列贴进去 然后点Analyze、Prime、OK这时可以看到上游引物结合的位置 同样的。6.pcr引物产物长度控制在多长合适你是想问引物长度还是PCR产物长度？引物一般20~25nt产物在500~1000nt之间比较容易操作7.引物设计原则miaoshukui123mi引物设计原则1.引物的长度一般为15-30bp，不适于TaqDNA聚合酶进行反应。2.引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，引物3’端出现3个以上的连续碱基，3.引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基A。引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。5’端序列对PCR影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物。上下游引物的GC含量不能相差太大。5.引物所对应模板位置序列的Tm值在72℃左右可使复性条件最佳。Tm值的计算有多种方法，6.ΔG值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端ΔG值较低（绝对值不超过9），而5’端和中间ΔG值相对较高的引物。引物的3’端的ΔG值过高。